- miRNA是一类大小约为22个碱基的小RNA分子。它们在转录后阶段对基因表达进行调控。调控机制是通过与靶基因的mRNA互补序列结合，抑制蛋白质的翻译或降低mRNA的稳定性，从而抑制靶基因的表达。miRNA在细胞的发育，分化，生长等生命活动中起着重要调控作用。楚天生物miRNA定量产品采用SYBR GreenI实时荧光PCR进行准确定量。我们提供人，小鼠和大鼠已经经过实验验证的miRNA定量试剂盒。如需对其它物种的miRNA定量，请与我们联系，我们提供定制服务。
- 产品特点
与楚天生物miRNA反转录试剂盒配合使用，构成miRNA定量的真正完整解决方案。客户无需设计PCR引物，无需优化反应体系。 - 产品经过实验验证，PCR扩增曲线正常，DNA熔解曲线呈单峰。查看部分miRNA的验证数据
- 独特的体系设计，使得所有miRNA可以在统一的条件下高效率扩增。
- 检测灵敏度实验：
将合成的人miR-141按10倍梯度稀释到1ug小鼠total RNA中，miR-141最高加入量为1.31E8 copies/ug total RNA, 最小加入量为131copies/ug total RNA。应用本公司的miRNA反转录试剂盒和人miR-141定量试剂盒，检测miR-141。图一为扩增曲线，图二为标准曲线作图。实验显示，131个分子的miR-141在1ug的小鼠total RNA背景中能准确地定量。
图一： 梯度稀释扩增曲线图
图二： 梯度稀释标准曲线
- miRNA定量原理
楚天生物采用当今基因定量的金标准——实时荧光PCR对miRNA进行定量检测。根据需要定量的miRNA个数，采用两种方法对miRNA进行反转录和定量。 - 1. PolyA加尾法
- 2. 茎环引物法
适用于miRNA数量较多的情况。首先通过E. coli Poly(A) 聚合酶在miRNA 3’端加多聚A尾，再使用楚天生物miRNA反转录试剂盒将其反转录为cDNA，然后应用楚天生物针对某一具体的miRNA设计的定量PCR引物对，利用SYBR Green I实时荧光PCR，定量检测该miRNA的含量。
图1 PolyA加尾法miRNA定量原理图
适用于若干个miRNA反转录和定量。反转录引物是在一个茎环结构上添加与microRNA3’端互补的若干个碱基，与目标miRNA结合后，通过茎环结构延长得到cDNA，然后应用楚天生物针对茎环引物环形结构区域的通用引物和miRNA特异性引物，利用SYBR Green I实时荧光PCR，定量检测该miRNA的含量。
图2 茎环法定量miRNA原理图
- 产品组成
qPCR引物 - SYBR MasterMix
- 产品使用说明书
提醒：试剂盒不包含反转录试剂。由于独特的设计，楚天生物miRNA定量试剂盒不与其它公司反转录试剂盒兼容，反转录请使用楚天生物miRNA反转录试剂盒。